霍亂弧菌免疫檢測相關(guān)產(chǎn)品
◆什么是霍亂？
霍亂是一種急性腸道傳染病，是我國法定的甲類傳染病，也是《國境衛(wèi)生檢疫法》規(guī)定的檢疫傳染病之一。自1817年以來，曾經(jīng)發(fā)生過七次世界性霍亂大流行，先后導(dǎo)致數(shù)千萬人死亡，對部分染疫地區(qū)的民眾生命健康、經(jīng)濟發(fā)展、社會穩(wěn)定等方面造成了毀滅性打擊。每年，全球大約有300萬～500萬人感染霍亂，死亡人數(shù)達10~12萬。
◆致病菌
霍亂弧菌，是引發(fā)霍亂的“幕后黑手”，對干燥、日光、熱、酸及一般消毒劑均敏感，能引起流行的有O1型和O139型，都可以分泌霍亂腸毒素，引發(fā)各種人體癥狀。
霍亂弧菌是一種烈性傳染病，其致病菌為霍亂弧菌。根據(jù)菌體(O)抗原的不同，霍亂弧菌已被分為200個以上的O血清群。O1和O139這兩種霍亂弧菌的血清型能夠引起疾病暴發(fā)，非O1非O139霍亂弧菌可引起輕度腹瀉，但不會造成疾病流行。O1群霍亂弧菌分為稻葉、小川和彥島(少見)3種血清型，霍亂在世界范圍內(nèi)已發(fā)生了7次大流行，均由O1群引起，波及100多個國家和地區(qū)，奪去了上千萬人的生命。而1992年首次在孟加拉國確定的O139血清型霍亂是近10年來肆虐于南亞，并波及亞、歐、美、非、澳五大洲的數(shù)十個國家和地區(qū)的一種新發(fā)現(xiàn)的烈性傳染病，目前已成為全球霍亂的優(yōu)勢菌群。
霍亂以發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣為特征，是《國際衛(wèi)生條例》規(guī)定的國際檢疫傳染病之一，也是《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的甲類傳染病之一。
世界衛(wèi)生組織《預(yù)防和控制霍亂疫情》中提到：如果從任何腹瀉患者的樣本中分離出O1或O139霍亂孤菌，則可確認為霍亂病例。1989年至2014年世界各洲發(fā)生霍亂的病例統(tǒng)計，見圖。
霍亂弧菌，是引發(fā)霍亂的“幕后黑手”，對干燥、日光、熱、酸及一般消毒劑均敏感，能引起流行的有O1型和O139型，都可以分泌霍亂腸毒素，引發(fā)各種人體癥狀。
Figure1 1989-2014 WHO接收各洲霍亂病例報告
各型弧菌產(chǎn)生類似的腸毒素，臨床表現(xiàn)也類似。每一 次霍亂流行都會有一個特定的優(yōu)勢型，且流行趨勢是在不斷變化的。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報告，2010年至2014年全球霍亂爆發(fā)區(qū)域見圖。
2022年7月9日晚，武昌區(qū)疾控中心接醫(yī)院報告，武漢大學(xué)出現(xiàn)一例感染性腹瀉病例，以嘔吐腹瀉為主，伴低熱，血清學(xué)凝集試驗為O139陽性。經(jīng)省市區(qū)三級疾控中心復(fù)核， 該病例的血清學(xué)凝集試驗為 O139 陽性，診斷為霍亂，毒力基因陰性。
霍亂流行迅速，且在流行期間發(fā)病率及死亡率均高，危害極大，因此早期迅速和正確的診斷，對治療和預(yù)防本病的蔓延有重大意義。
◆霍亂診斷與檢測
我國《霍亂診斷標(biāo)準(zhǔn)》指出，霍亂的實驗室檢測要求對患者的糞便、嘔吐物或肛拭子經(jīng)細菌培養(yǎng)分離，做霍亂弧菌快速輔助檢測試驗，作為綜合診斷霍亂的依據(jù)之一。
其實霍亂弧菌檢測方式有很多，如以化學(xué)法檢測糞便潛血需要采集前三天避免進食紅肉、肝臟及菠菜、甘藍、花椰菜等食物，以避免造成偽陽性結(jié)果。
因等待時間過長，限制過多，為盡早避免陽性產(chǎn)生的大范圍傳染情況，采用免疫法檢測糞便潛血，為最快最直觀的檢測方法。
目前針對霍亂弧菌的RDT是一種基于金標(biāo)抗體或熒光標(biāo)記抗體的免疫層析試紙條檢測技術(shù)，霍亂弧菌快速檢測卡是利用單克隆抗體膠體金標(biāo)記技術(shù)和膜層析技術(shù)研制而成，用于定性檢測樣本中可能存在的霍亂弧菌的特異性抗原 O1及O139血清型 。
霍亂弧菌的快速準(zhǔn)確檢測和區(qū)分群型，對霍亂流行的檢測與預(yù)防及制定相應(yīng)的防治對策意義重大。 Seebio 公司自行研發(fā)的檢測霍亂的抗體具有極高的靈敏度和特異性，并能夠?qū)Σ煌幕魜y弧菌進行精確分型。同時，各抗體既可單獨使用，也可聯(lián)合使用，并且可以應(yīng)用在不同檢測平臺上。這些特性在科研或者流行病監(jiān)測當(dāng)中有著不可替代的價值。Seebio研發(fā)人員從高效價細胞株篩選中制備的抗霍亂弧菌單克隆抗體用于免疫層析檢測試劑盒的開發(fā)應(yīng)用。
首先，以滅活的各霍亂弧菌為免疫原對小鼠進行免疫，細胞融合后,經(jīng)間接ELISA篩選及3次連續(xù)克隆化。得到一系列雜交瘤細胞。從194株雜交瘤細胞中選得抗01群小川型霍亂弧菌單克隆抗體的2株雜交瘤細胞，分別分泌VC O1-OgawamAb1及VC 01-Ogawa mAb2 ;從237株雜交瘤細胞中選得抗01群霍亂弧菌單克隆抗體的4株雜交瘤細胞，分別分泌VC O1 mAb1, VC O1 mAb2 , VC O1 mAb3及VC O1mAb4;從286株雜交瘤細胞中選得抗O139群霍亂弧菌單克隆抗體的2株雜交瘤細胞,分別分泌VC O139 mAb1及VC0139 mAb2。并對篩選的細胞株抗體做配對驗證，特異性、靈敏度檢測以及滴度鑒定等最終篩選出優(yōu)質(zhì)的抗體對產(chǎn)品。
Seebio公司目前研發(fā)篩選出的檢測霍亂弧菌單克隆抗體能夠特異性識別01-小川型、01-稻葉型和0139群霍亂弧菌,具有特異性好,靈敏度高等特點,并且適用于各種免疫平臺。這些抗體可用于ELISA、Western-blot、金標(biāo)試紙等不同用途的免疫學(xué)檢測系統(tǒng)的開發(fā)。
◆Seebio霍亂弧菌抗體在ELISA中的應(yīng)用
以間接ELISA檢測抗體滴度示例。將各滅活的霍亂弧菌菌液以包被液稀釋后包板。封閉后加入倍比稀釋的·各抗霍亂弧菌抗體作為一抗，以包被液為陰性對照。再加入1:5000稀釋的HRP-羊抗鼠IgG抗體作為二抗，TMB顯色后于波長450nm測定OD值。
◆Seebio霍亂弧菌抗體在金標(biāo)試紙中的應(yīng)用
用包被和偶聯(lián)抗體組裝膠體金測試卡，將01-小川型、O1-稻葉型、O139群霍亂弧菌滅活菌液倍比稀釋,用膠體金試紙條檢測,評價各自的靈敏度。
檢測結(jié)果如圖所示：
金標(biāo)試紙對01群小川型霍亂弧菌的檢測靈敏度達104cfu/mL,
對01群稻葉型霍亂弧菌檢測靈敏度達105cfu /mL,
對0139型霍亂弧菌檢測靈敏度達104cfu /mL
◆Seebio霍亂弧菌抗體在Westblot中的應(yīng)用
滅活的測試菌菌液經(jīng) SDS-PAGE電泳，然后經(jīng)轉(zhuǎn)膜、洗膜等處理后，分別加入VC O1-OgawamAb1 , VC O1-Ogawa mAb2 , VC O139mAb1和VC O139 mAb2做為一抗，最后以HRP標(biāo)記羊抗鼠IgG抗體做二抗進行檢測。檢測結(jié)果如圖所示:
1: VC O1-Ogawa mAb1 ;2: VC O1-Ogawa mAb2; 3 : VC O139 mAb1; 4: VC O139 mAb2
◆Seebio霍亂弧菌產(chǎn)品詳情
產(chǎn)品 | 類型 | 來源 | 規(guī)格 | 貨號 | 建議使用 |
霍亂弧菌O1-Ogaw（O1-小川型）抗體 | 抗體 | Mouse | 1mg | EKY0305A（標(biāo)記） EKY0305B（包被） | 雙抗夾心法 ELISA、LF平臺 |
霍亂弧菌O1群（小川型和稻葉型）抗體 | 抗體 | Mouse | 1mg | EKY0307A（標(biāo)記） EKY0307B（包被） | |
霍亂弧菌O139群抗體 | 抗體 | Mouse | 1mg | EKY0308A（標(biāo)記） EKY0308B（包被） | |
霍亂弧菌O1群陽性質(zhì)控品 | 質(zhì)控 | EDD0714A（陽性質(zhì)控） | |||
霍亂弧菌O139群陽性質(zhì)控品 | 質(zhì)控 | EDD0712A（陽性質(zhì)控） |
霍亂弧菌免疫檢測相關(guān)產(chǎn)品
◆什么是霍亂？
霍亂是一種急性腸道傳染病，是我國法定的甲類傳染病，也是《國境衛(wèi)生檢疫法》規(guī)定的檢疫傳染病之一。自1817年以來，曾經(jīng)發(fā)生過七次世界性霍亂大流行，先后導(dǎo)致數(shù)千萬人死亡，對部分染疫地區(qū)的民眾生命健康、經(jīng)濟發(fā)展、社會穩(wěn)定等方面造成了毀滅性打擊。每年，全球大約有300萬～500萬人感染霍亂，死亡人數(shù)達10~12萬。
◆致病菌
霍亂弧菌，是引發(fā)霍亂的“幕后黑手”，對干燥、日光、熱、酸及一般消毒劑均敏感，能引起流行的有O1型和O139型，都可以分泌霍亂腸毒素，引發(fā)各種人體癥狀。
霍亂弧菌是一種烈性傳染病，其致病菌為霍亂弧菌。根據(jù)菌體(O)抗原的不同，霍亂弧菌已被分為200個以上的O血清群。O1和O139這兩種霍亂弧菌的血清型能夠引起疾病暴發(fā)，非O1非O139霍亂弧菌可引起輕度腹瀉，但不會造成疾病流行。O1群霍亂弧菌分為稻葉、小川和彥島(少見)3種血清型，霍亂在世界范圍內(nèi)已發(fā)生了7次大流行，均由O1群引起，波及100多個國家和地區(qū)，奪去了上千萬人的生命。而1992年首次在孟加拉國確定的O139血清型霍亂是近10年來肆虐于南亞，并波及亞、歐、美、非、澳五大洲的數(shù)十個國家和地區(qū)的一種新發(fā)現(xiàn)的烈性傳染病，目前已成為全球霍亂的優(yōu)勢菌群。
霍亂以發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣為特征，是《國際衛(wèi)生條例》規(guī)定的國際檢疫傳染病之一，也是《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的甲類傳染病之一。
世界衛(wèi)生組織《預(yù)防和控制霍亂疫情》中提到：如果從任何腹瀉患者的樣本中分離出O1或O139霍亂孤菌，則可確認為霍亂病例。1989年至2014年世界各洲發(fā)生霍亂的病例統(tǒng)計，見圖。
霍亂弧菌，是引發(fā)霍亂的“幕后黑手”，對干燥、日光、熱、酸及一般消毒劑均敏感，能引起流行的有O1型和O139型，都可以分泌霍亂腸毒素，引發(fā)各種人體癥狀。
Figure1 1989-2014 WHO接收各洲霍亂病例報告
各型弧菌產(chǎn)生類似的腸毒素，臨床表現(xiàn)也類似。每 一 次霍亂流行都會有一個特定的優(yōu)勢型，且流行趨勢是在不斷變化的。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報告，2010年至2014年全球霍亂爆發(fā)區(qū)域見圖。
2022年7月9日晚，武昌區(qū)疾控中心接醫(yī)院報告，武漢大學(xué)出現(xiàn)一例感染性腹瀉病例，以嘔吐腹瀉為主，伴低熱，血清學(xué)凝集試驗為O139陽性。經(jīng)省市區(qū)三級疾控中心復(fù)核， 該病例的血清學(xué)凝集試驗為 O139 陽性，診斷為霍亂，毒力基因陰性。
霍亂流行迅速，且在流行期間發(fā)病率及死亡率均高，危害極大，因此早期迅速和正確的診斷，對治療和預(yù)防本病的蔓延有重大意義。
◆霍亂診斷與檢測
我國《霍亂診斷標(biāo)準(zhǔn)》指出，霍亂的實驗室檢測要求對患者的糞便、嘔吐物或肛拭子經(jīng)細菌培養(yǎng)分離，做霍亂弧菌快速輔助檢測試驗，作為綜合診斷霍亂的依據(jù)之一。
其實霍亂弧菌檢測方式有很多，如以化學(xué)法檢測糞便潛血需要采集前三天避免進食紅肉、肝臟及菠菜、甘藍、花椰菜等食物，以避免造成偽陽性結(jié)果。
因等待時間過長，限制過多，為盡早避免陽性產(chǎn)生的大范圍傳染情況，采用免疫法檢測糞便潛血，為最快最直觀的檢測方法。
目前針對霍亂弧菌的RDT是一種基于金標(biāo)抗體或熒光標(biāo)記抗體的免疫層析試紙條檢測技術(shù)，霍亂弧菌快速檢測卡是利用單克隆抗體膠體金標(biāo)記技術(shù)和膜層析技術(shù)研制而成，用于定性檢測樣本中可能存在的霍亂弧菌的特異性抗原 O1及O139血清型 。
霍亂弧菌的快速準(zhǔn)確檢測和區(qū)分群型，對霍亂流行的檢測與預(yù)防及制定相應(yīng)的防治對策意義重大。 Seebio 公司自行研發(fā)的檢測霍亂的抗體具有極高的靈敏度和特異性，并能夠?qū)Σ煌幕魜y弧菌進行精確分型。同時，各抗體既可單獨使用，也可聯(lián)合使用，并且可以應(yīng)用在不同檢測平臺上。這些特性在科研或者流行病監(jiān)測當(dāng)中有著不可替代的價值。Seebio研發(fā)人員從高效價細胞株篩選中制備的抗霍亂弧菌單克隆抗體用于免疫層析檢測試劑盒的開發(fā)應(yīng)用。
首先，以滅活的各霍亂弧菌為免疫原對小鼠進行免疫，細胞融合后,經(jīng)間接ELISA篩選及3次連續(xù)克隆化。得到一系列雜交瘤細胞。從194株雜交瘤細胞中選得抗01群小川型霍亂弧菌單克隆抗體的2株雜交瘤細胞，分別分泌VC O1-OgawamAb1及VC 01-Ogawa mAb2 ;從237株雜交瘤細胞中選得抗01群霍亂弧菌單克隆抗體的4株雜交瘤細胞，分別分泌VC O1 mAb1, VC O1 mAb2 , VC O1 mAb3及VC O1mAb4;從286株雜交瘤細胞中選得抗O139群霍亂弧菌單克隆抗體的2株雜交瘤細胞,分別分泌VC O139 mAb1及VC0139 mAb2。并對篩選的細胞株抗體做配對驗證，特異性、靈敏度檢測以及滴度鑒定等最終篩選出優(yōu)質(zhì)的抗體對產(chǎn)品。
Seebio公司目前研發(fā)篩選出的檢測霍亂弧菌單克隆抗體能夠特異性識別01-小川型、01-稻葉型和0139群霍亂弧菌,具有特異性好,靈敏度高等特點,并且適用于各種免疫平臺。這些抗體可用于ELISA、Western-blot、金標(biāo)試紙等不同用途的免疫學(xué)檢測系統(tǒng)的開發(fā)。
◆Seebio霍亂弧菌抗體在ELISA中的應(yīng)用
以間接ELISA檢測抗體滴度示例。將各滅活的霍亂弧菌菌液以包被液稀釋后包板。封閉后加入倍比稀釋的·各抗霍亂弧菌抗體作為一抗，以包被液為陰性對照。再加入1:5000稀釋的HRP-羊抗鼠IgG抗體作為二抗，TMB顯色后于波長450nm測定OD值。
◆Seebio霍亂弧菌抗體在金標(biāo)試紙中的應(yīng)用
用包被和偶聯(lián)抗體組裝膠體金測試卡，將01-小川型、O1-稻葉型、O139群霍亂弧菌滅活菌液倍比稀釋,用膠體金試紙條檢測,評價各自的靈敏度。
檢測結(jié)果如圖所示：
金標(biāo)試紙對01群小川型霍亂弧菌的檢測靈敏度達104cfu/mL,
對01群稻葉型霍亂弧菌檢測靈敏度達105cfu/mL,
對0139型霍亂弧菌檢測靈敏度達104cfu/mL
◆Seebio霍亂弧菌抗體在Westblot中的應(yīng)用
滅活的測試菌菌液經(jīng) SDS-PAGE電泳，然后經(jīng)轉(zhuǎn)膜、洗膜等處理后，分別加入VC O1-OgawamAb1 , VC O1-Ogawa mAb2 , VC O139mAb1和VC O139 mAb2做為一抗，最后以HRP標(biāo)記羊抗鼠IgG抗體做二抗進行檢測。檢測結(jié)果如圖所示:
1: VC O1-Ogawa mAb1 ;2: VC O1-Ogawa mAb2; 3 : VC O139 mAb1; 4: VC O139 mAb2
◆Seebio霍亂弧菌產(chǎn)品詳情
