在蛋白質(zhì)組學(xué)、生物制藥開發(fā)及翻譯后修飾分析等前沿生物研究領(lǐng)域中，高特異性、高純度的工具酶發(fā)揮著不可或缺的關(guān)鍵作用。隨著重組DNA技術(shù)的不斷進(jìn)步，重組工具酶憑借其顯著性能優(yōu)勢(shì)，正逐步取代傳統(tǒng)動(dòng)物源酶，成為科研探索與工業(yè)生產(chǎn)的核心試劑。
西寶生物布局高純度重組工具酶賽道，依托在重組蛋白技術(shù)領(lǐng)域的深厚積累，重點(diǎn)開發(fā)一系列高特異性、測(cè)序級(jí)別的重組工具酶產(chǎn)品。以卓越的批次間穩(wěn)定性和可擴(kuò)展性，滿足從基礎(chǔ)科研到大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)對(duì)關(guān)鍵試劑日益增長(zhǎng)的需求，彰顯了公司賦能生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)鏈的決心與實(shí)力。
一、蛋白酶類：蛋白質(zhì)酶解的核心工具
蛋白酶類的核心功能是將完整蛋白質(zhì)切割為適合分析的肽段，其切割特異性直接決定了酶解效果與后續(xù)分析的準(zhǔn)確性。
（一）測(cè)序級(jí)重組賴氨酰內(nèi)切酶（rLys-C）
作為絲氨酸蛋白酶，該酶具有極強(qiáng)的特異性，僅在賴氨酸殘基的 C 末端切割肽鍵。由于賴氨酸在蛋白質(zhì)中的出現(xiàn)頻率低于胰蛋白酶的主要切割位點(diǎn)（精氨酸 R 和賴氨酸 K），其酶解產(chǎn)物多為較長(zhǎng)肽段。在實(shí)際應(yīng)用中，rLys-C 常與胰蛋白酶聯(lián)用，先經(jīng) rLys-C 初步消化，再用胰蛋白酶進(jìn)一步切割，可顯著提升酶解覆蓋度，尤其適用于膜蛋白、難溶蛋白等難處理樣本的分析。此外，該酶還廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析、胰島素類似物生產(chǎn)及肽圖譜制作。其重組表達(dá)特性賦予了無(wú)動(dòng)物源性污染，最適反應(yīng) pH 為 9.0-9.5。
（二）重組胰蛋白酶
胰蛋白酶是目前應(yīng)用最廣泛的蛋白質(zhì)酶解工具酶，特異性切割精氨酸（R）和賴氨酸（K）殘基的 C 末端肽鍵，且不切割被脯氨酸（P）緊隨其后的 R/K 位點(diǎn)。其酶解產(chǎn)生的肽段長(zhǎng)度多在 500-2500 Da 范圍內(nèi)，完美匹配質(zhì)譜分析的需求。在蛋白質(zhì)組學(xué)、測(cè)序鑒定及翻譯后修飾分析中，胰蛋白酶均為優(yōu)選酶類。
胰蛋白酶酶切DivIB胞外片段
（三）測(cè)序級(jí)重組糜蛋白酶
該酶為絲氨酸內(nèi)肽酶，選擇性切割Tyr/Phe/Trp殘基的 C 末端，最適 pH 為 7.0-9.0。與胰蛋白酶形成互補(bǔ)，可提高富含疏水氨基酸區(qū)域的序列覆蓋度，生成重疊肽段用于從頭測(cè)序或序列確認(rèn)，在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中作為胰蛋白酶的補(bǔ)充工具。2-8℃條件下可穩(wěn)定 24 個(gè)月，適用于蛋白測(cè)序、抗體輕鏈分析等場(chǎng)景 。
ATP添加下糜蛋白酶對(duì)SecA的不完全酶切
（四）重組羧肽酶 B（CPB）
測(cè)序級(jí)重組羧肽酶 B（CPB）是一種 Zn2?金屬蛋白酶，特異性從蛋白質(zhì)或肽的 C 末端依次切除堿性氨基酸（精氨酸 R、賴氨酸 K）。其核心應(yīng)用包括三個(gè)方面：一是 C 末端測(cè)序，與質(zhì)譜聯(lián)用通過監(jiān)測(cè)隨時(shí)間釋放的氨基酸可確定 C 末端序列；二是重組蛋白加工，去除表達(dá)產(chǎn)物 C 端額外帶有的精氨酸 / 賴氨酸（來自標(biāo)簽序列），實(shí)現(xiàn)蛋白的精準(zhǔn)修飾；三是胰島素前體加工研究，用于模擬生理加工過程。在實(shí)際應(yīng)用中，CPB 常用于抗體堿性峰檢測(cè)與 C 端序列分析，是生物制藥中蛋白精準(zhǔn)修飾的關(guān)鍵工具。
（五）重組 N - 糖苷酶 F（PNGase F）
糖基化是蛋白質(zhì)重要的翻譯后修飾，對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能具有關(guān)鍵影響，而重組 N - 糖苷酶 F（PNGase F）是 N - 糖基化分析的核心工具酶。
重組 N - 糖苷酶 F處理效果
PNGase F 能夠特異性水解天冬酰胺（Asn）與 N-聚糖之間的酰胺鍵，可裂解幾乎所有類型的哺乳動(dòng)物 N-聚糖，僅對(duì)核心 ɑ1-3 巖藻糖修飾的 N-聚糖無(wú)活性。其作用機(jī)制是將完整的糖鏈釋放，并將連接位點(diǎn)的天冬酰胺轉(zhuǎn)化為天冬氨酸（Asp）。這一特性為糖基化分析提供了多方面的支持：在去糖基化方面，PNGase F 能夠從糖蛋白上移除 N-聚糖，從而簡(jiǎn)化質(zhì)譜鑒定并提高酶解效率；在糖基化位點(diǎn)鑒定中，去糖基化導(dǎo)致原糖基化位點(diǎn)的 Asn 轉(zhuǎn)變?yōu)?Asp，在質(zhì)譜分析中引起質(zhì)量數(shù)增加，有助于精確定位修飾位點(diǎn)；在聚糖結(jié)構(gòu)分析中，釋放出的完整聚糖可進(jìn)一步通過質(zhì)譜、HPLC 等技術(shù)解析其結(jié)構(gòu)。得益于重組表達(dá)技術(shù)，PNGase F 已成為糖蛋白去糖基化、抗體糖型分析等研究中的關(guān)鍵工具酶。
（六）胃蛋白酶
作為酸性天冬氨酸蛋白酶，胃蛋白酶的切割位點(diǎn)較為廣泛，偏好疏水性氨基酸或芳香族氨基酸周圍的肽鍵，其最適活性 pH 為 1.0-5.0，在酸性條件下表現(xiàn)出優(yōu)異的穩(wěn)定性。核心應(yīng)用包括蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析（非變性條件下產(chǎn)生較大片段以研究結(jié)構(gòu)域）、抗體工程（制備抗體 F (ab') ）、血清制品消化、疫苗生產(chǎn)及質(zhì)譜前處理。
胃蛋白酶消化
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貨號(hào) | CAS | 產(chǎn)品 |
EXK0369F | 72561-05-8 | 重組賴氨酰內(nèi)切酶（rLys-C） |
DCE0060Z | 9002-07-7 | 重組胰蛋白酶 |
| DYY0313E | 9004-07-3 | 重組糜蛋白酶 |
| DBY0114C | 9025-24-5 | 重組羧肽酶B |
ECE0441H | 83534-39-8 | 重組N-糖苷酶 F |
DCE0115J | 9001-75-6 | 胃蛋白酶（豬胃粘膜） |
二、應(yīng)用場(chǎng)景
蛋白質(zhì)組學(xué)研究：胰蛋白酶、rLys-C 及糜蛋白酶等多種蛋白酶可聯(lián)合使用，通過互補(bǔ)的酶切特性實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的高效、全面酶解，從而為質(zhì)譜分析提供覆蓋度更廣、質(zhì)量更高的肽段片段；
蛋白質(zhì)測(cè)序與鑒定：涵蓋 N 端、C 端及內(nèi)部肽段序列分析，常用 rLys-C、胰蛋白酶等進(jìn)行特異性酶切，結(jié)合羧肽酶 B 等工具酶輔助完成 C 端序列鑒定。
翻譯后修飾分析：PNGase F 用于 N-連接聚糖的去除，以解析 N-糖基化位點(diǎn)。
生物制藥：應(yīng)用于胰島素類似物的酶法制備、抗體工程（如 Fab 片段生成、糖基化表征）以及重組蛋白的精確酶促修飾等關(guān)鍵工藝步驟。
結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究：胃蛋白酶可用于蛋白質(zhì)有限酶切，進(jìn)而分析其結(jié)構(gòu)域組成及研究蛋白質(zhì)構(gòu)象與折疊狀態(tài)。
參考
1. Soizic Masson, et al. Central Domain of DivIB Caps the C-terminal Regions of the FtsL/DivIC Coiled-coil Rod. DOI: 10.1074/jbc.M109.019471
2. A Price, et al. Separable ATPase and membrane insertion domains of the SecA subunit of preprotein translocase.J Biol Chem. 1996 Dec 6;271(49):31580-4
3. Randall A. Kopper, et al. Peanut protein allergens: Gastric digestion is carried out exclusively by pepsin. DOI: 10.1016/j.jaci.2004.05.012
4. Bianca C. Bernardo, et al. Cartilage Intermediate Layer Protein 2 (CILP-2) Is Expressed in Articular and Meniscal Cartilage and Down-regulated in Experimental Osteoarthritis. J Biol Chem. 2011 Oct 28;286(43):37758-67
在蛋白質(zhì)組學(xué)、生物制藥開發(fā)及翻譯后修飾分析等前沿生物研究領(lǐng)域中，高特異性、高純度的工具酶發(fā)揮著不可或缺的關(guān)鍵作用。隨著重組DNA技術(shù)的不斷進(jìn)步，重組工具酶憑借其顯著性能優(yōu)勢(shì)，正逐步取代傳統(tǒng)動(dòng)物源酶，成為科研探索與工業(yè)生產(chǎn)的核心試劑。
西寶生物布局高純度重組工具酶賽道，依托在重組蛋白技術(shù)領(lǐng)域的深厚積累，重點(diǎn)開發(fā)一系列高特異性、測(cè)序級(jí)別的重組工具酶產(chǎn)品。以卓越的批次間穩(wěn)定性和可擴(kuò)展性，滿足從基礎(chǔ)科研到大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)對(duì)關(guān)鍵試劑日益增長(zhǎng)的需求，彰顯了公司賦能生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)鏈的決心與實(shí)力。
一、蛋白酶類：蛋白質(zhì)酶解的核心工具
蛋白酶類的核心功能是將完整蛋白質(zhì)切割為適合分析的肽段，其切割特異性直接決定了酶解效果與后續(xù)分析的準(zhǔn)確性。
（一）測(cè)序級(jí)重組賴氨酰內(nèi)切酶（rLys-C）
作為絲氨酸蛋白酶，該酶具有極強(qiáng)的特異性，僅在賴氨酸殘基的 C 末端切割肽鍵。由于賴氨酸在蛋白質(zhì)中的出現(xiàn)頻率低于胰蛋白酶的主要切割位點(diǎn)（精氨酸 R 和賴氨酸 K），其酶解產(chǎn)物多為較長(zhǎng)肽段。在實(shí)際應(yīng)用中，rLys-C 常與胰蛋白酶聯(lián)用，先經(jīng) rLys-C 初步消化，再用胰蛋白酶進(jìn)一步切割，可顯著提升酶解覆蓋度，尤其適用于膜蛋白、難溶蛋白等難處理樣本的分析。此外，該酶還廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析、胰島素類似物生產(chǎn)及肽圖譜制作。其重組表達(dá)特性賦予了無(wú)動(dòng)物源性污染，最適反應(yīng) pH 為 9.0-9.5。
（二）重組胰蛋白酶
胰蛋白酶是目前應(yīng)用最廣泛的蛋白質(zhì)酶解工具酶，特異性切割精氨酸（R）和賴氨酸（K）殘基的 C 末端肽鍵，且不切割被脯氨酸（P）緊隨其后的 R/K 位點(diǎn)。其酶解產(chǎn)生的肽段長(zhǎng)度多在 500-2500 Da 范圍內(nèi)，完美匹配質(zhì)譜分析的需求。在蛋白質(zhì)組學(xué)、測(cè)序鑒定及翻譯后修飾分析中，胰蛋白酶均為優(yōu)選酶類。
胰蛋白酶酶切DivIB胞外片段
（三）測(cè)序級(jí)重組糜蛋白酶
該酶為絲氨酸內(nèi)肽酶，選擇性切割Tyr/Phe/Trp殘基的 C 末端，最適 pH 為 7.0-9.0。與胰蛋白酶形成互補(bǔ)，可提高富含疏水氨基酸區(qū)域的序列覆蓋度，生成重疊肽段用于從頭測(cè)序或序列確認(rèn)，在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中作為胰蛋白酶的補(bǔ)充工具。2-8℃條件下可穩(wěn)定 24 個(gè)月，適用于蛋白測(cè)序、抗體輕鏈分析等場(chǎng)景 。
ATP添加下糜蛋白酶對(duì)SecA的不完全酶切
（四）重組羧肽酶 B（CPB）
測(cè)序級(jí)重組羧肽酶 B（CPB）是一種 Zn2?金屬蛋白酶，特異性從蛋白質(zhì)或肽的 C 末端依次切除堿性氨基酸（精氨酸 R、賴氨酸 K）。其核心應(yīng)用包括三個(gè)方面：一是 C 末端測(cè)序，與質(zhì)譜聯(lián)用通過監(jiān)測(cè)隨時(shí)間釋放的氨基酸可確定 C 末端序列；二是重組蛋白加工，去除表達(dá)產(chǎn)物 C 端額外帶有的精氨酸 / 賴氨酸（來自標(biāo)簽序列），實(shí)現(xiàn)蛋白的精準(zhǔn)修飾；三是胰島素前體加工研究，用于模擬生理加工過程。在實(shí)際應(yīng)用中，CPB 常用于抗體堿性峰檢測(cè)與 C 端序列分析，是生物制藥中蛋白精準(zhǔn)修飾的關(guān)鍵工具。
（五）重組 N - 糖苷酶 F（PNGase F）
糖基化是蛋白質(zhì)重要的翻譯后修飾，對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能具有關(guān)鍵影響，而重組 N - 糖苷酶 F（PNGase F）是 N - 糖基化分析的核心工具酶。
重組 N - 糖苷酶 F處理效果
PNGase F 能夠特異性水解天冬酰胺（Asn）與 N-聚糖之間的酰胺鍵，可裂解幾乎所有類型的哺乳動(dòng)物 N-聚糖，僅對(duì)核心 ɑ1-3 巖藻糖修飾的 N-聚糖無(wú)活性。其作用機(jī)制是將完整的糖鏈釋放，并將連接位點(diǎn)的天冬酰胺轉(zhuǎn)化為天冬氨酸（Asp）。這一特性為糖基化分析提供了多方面的支持：在去糖基化方面，PNGase F 能夠從糖蛋白上移除 N-聚糖，從而簡(jiǎn)化質(zhì)譜鑒定并提高酶解效率；在糖基化位點(diǎn)鑒定中，去糖基化導(dǎo)致原糖基化位點(diǎn)的 Asn 轉(zhuǎn)變?yōu)?Asp，在質(zhì)譜分析中引起質(zhì)量數(shù)增加，有助于精確定位修飾位點(diǎn)；在聚糖結(jié)構(gòu)分析中，釋放出的完整聚糖可進(jìn)一步通過質(zhì)譜、HPLC 等技術(shù)解析其結(jié)構(gòu)。得益于重組表達(dá)技術(shù)，PNGase F 已成為糖蛋白去糖基化、抗體糖型分析等研究中的關(guān)鍵工具酶。
（六）胃蛋白酶
作為酸性天冬氨酸蛋白酶，胃蛋白酶的切割位點(diǎn)較為廣泛，偏好疏水性氨基酸或芳香族氨基酸周圍的肽鍵，其最適活性 pH 為 1.0-5.0，在酸性條件下表現(xiàn)出優(yōu)異的穩(wěn)定性。核心應(yīng)用包括蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析（非變性條件下產(chǎn)生較大片段以研究結(jié)構(gòu)域）、抗體工程（制備抗體 F (ab') ）、血清制品消化、疫苗生產(chǎn)及質(zhì)譜前處理。
胃蛋白酶消化
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貨號(hào) | CAS | 產(chǎn)品 |
EXK0369F | 72561-05-8 | 重組賴氨酰內(nèi)切酶（rLys-C） |
DCE0060Z | 9002-07-7 | 重組胰蛋白酶 |
| DYY0313E | 9004-07-3 | 重組糜蛋白酶 |
| DBY0114C | 9025-24-5 | 重組羧肽酶B |
ECE0441H | 83534-39-8 | 重組N-糖苷酶 F |
DCE0115J | 9001-75-6 | 胃蛋白酶（豬胃粘膜） |
二、應(yīng)用場(chǎng)景
蛋白質(zhì)組學(xué)研究：胰蛋白酶、rLys-C 及糜蛋白酶等多種蛋白酶可聯(lián)合使用，通過互補(bǔ)的酶切特性實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的高效、全面酶解，從而為質(zhì)譜分析提供覆蓋度更廣、質(zhì)量更高的肽段片段；
蛋白質(zhì)測(cè)序與鑒定：涵蓋 N 端、C 端及內(nèi)部肽段序列分析，常用 rLys-C、胰蛋白酶等進(jìn)行特異性酶切，結(jié)合羧肽酶 B 等工具酶輔助完成 C 端序列鑒定。
翻譯后修飾分析：PNGase F 用于 N-連接聚糖的去除，以解析 N-糖基化位點(diǎn)。
生物制藥：應(yīng)用于胰島素類似物的酶法制備、抗體工程（如 Fab 片段生成、糖基化表征）以及重組蛋白的精確酶促修飾等關(guān)鍵工藝步驟。
結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究：胃蛋白酶可用于蛋白質(zhì)有限酶切，進(jìn)而分析其結(jié)構(gòu)域組成及研究蛋白質(zhì)構(gòu)象與折疊狀態(tài)。
參考
1. Soizic Masson, et al. Central Domain of DivIB Caps the C-terminal Regions of the FtsL/DivIC Coiled-coil Rod. DOI: 10.1074/jbc.M109.019471
2. A Price, et al. Separable ATPase and membrane insertion domains of the SecA subunit of preprotein translocase.J Biol Chem. 1996 Dec 6;271(49):31580-4
3. Randall A. Kopper, et al. Peanut protein allergens: Gastric digestion is carried out exclusively by pepsin. DOI: 10.1016/j.jaci.2004.05.012
4. Bianca C. Bernardo, et al. Cartilage Intermediate Layer Protein 2 (CILP-2) Is Expressed in Articular and Meniscal Cartilage and Down-regulated in Experimental Osteoarthritis. J Biol Chem. 2011 Oct 28;286(43):37758-67
